染色步骤：

（一） 冰冻切片

1、冰冻切片，滴加4%多聚甲醛（PFA），室温固定5分钟；

2、纯水洗涤3次，每次5分钟；

3、疏水笔画圈（稍大点）；

4、纯水洗涤3次，每次1分种；

5、滴加SA-beta-Gal染色液(100ul/圈)；

6、37℃染色过液2-24小时，镜下观察。

7、染色结束后，纯水洗涤3次，每次2分钟；

8、核固红复染细胞核（选做）；

9、水性封片剂封片。

（二）细胞样本

1、培养细胞去除培养液后，PBS洗2次，4%PFA室温固定5分钟；

2、PBS洗3次，PFA尽量去除干净；

3、加SA-beta-Gal染色液（1.5-2ml/35mm dish)；

4、37℃染色2-24小时，镜下观察；

5、染色结束后，PBS洗涤3次；

6、培养皿中留少许PBS，镜下拍照。

注意事项：

1、染色液应现配现用。

2、染色12小时后，如无蓝色的阳性着色，可延长染色时间至24小时。

3、组织样品后固定效果较好。即先进行OCT速冻包埋，切片后再用4%PFA进行固定。

4、衰老相关β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH值，不能用于细胞培养的CO2培养箱中进行染色反应。因为CO2培养箱中较高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。

5、本试剂盒适合各种类型和规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35 mm 培养皿和各种孔数的细胞培养板，只需按照一定的比例调整工作液用量即可。

6、需自备PBS或HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)

更多信息：SA-β-gal

http://www.bi-gene.com/Products-36085108.html
https://www.chem17.com/st431186/product_36085108.html