A. 产物纯化操作步骤(必选)
1、准备工作:将 AMPure XP Beads 室温平衡 30 min。配制 80% 乙醇。
2、吸取 48 μL AMPure XP Beads (1 .2×,Beads:DNA=1.2:1) 至接头连接产物中, 涡旋混 匀或移液器吹打 10 次混匀,室温孵育 5 min。
3、短暂离心并置于磁力架上,待溶液澄清后(约 5 min),弃上清。
4、保持 PCR 管始终置于磁力架中,加入 200 μL 新鲜配制的 80% 乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 sec,弃上清。
5、重复步骤 4。
6、保持 PCR 管始终置于磁力架中,开盖干燥磁珠至刚出现龟裂(约 5 min)*。
7、
1) 如产物无需进行片段分选,将 PCR 管从磁力架中取出,磁珠 ( 无需用水洗脱 ) 直接用于文库扩增步骤反应。
2) 如产物需进行双轮分选, 加入 52-102 μL Nuclease-free Water,涡旋振荡或轻轻吹打至充分混匀,室温静置 5 min。将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中静置,待溶液澄清 后(约 5 min) ,小心移取 50-100 μL 上清至新 PCR 管中,切勿触碰磁珠(洗脱体积越大,洗脱效率越高,分选效果越好,详细说明见注意事项)。
B. 双轮分选操作步骤(可选)
1、准备工作:将 AMPure XP Beads 室温平衡 30 min。配制 80% 乙醇。
2、根据 DNA 片段长度要求,参考表 4 向纯化产物中加入第一轮分选磁珠,涡旋混匀或移液 器吹打 10 次混匀。
3、室温孵育 5min。将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中,待溶液澄清后(约 5 min) ,小 心转移上清到干净的 PCR 管中。
4、参考表 4 向上清中加入第二轮分选磁珠。涡旋混匀或移液器吹打 10 次混匀,室温静置 5 min。
5、 将 PCR 管短暂离心并置于磁力架中,待溶液澄清后(约 5 min),弃上清。
6、保持 PCR 管始终处于磁力架中,加入 200 μL 新鲜配制的 80% 乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 sec,弃上清。
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https://www.chem17.com/st416474/product_37528111.html